Gentechnische Herstellung von Faktor 8 mit cDNA

[Nour-al-Zahraa]

 

Inshallah geht es euch gut meine lieben?

 

Ich habe eine kurze Frage, inshallah kann mir jemand weiterhelfen...

 

Momentan lerne ich die gentechnische Herstellung von Faktor 8, bzw generell die Medikamentenetwicklung aber halt am Beispiel von Faktor 8 ^^

 

Mir ist klar, dass die mRNA erstmal aus der Leberzelle isoliert werden muss, und dann mit der Reversen Transkription eine cDNA hergestellt werden muss.

 

Aber da liegt auch mein Problem, irgendwie weiß ich nicht, was ich mir unter eine cDNA vorstellen soll.

cDNA bedeutet ja Copy-DNA, aber was wird kopiert? Wird das Gen bzw die DNA-Sequenz repliziert nachdem sie mit Restrikitionsenzyme geschnitten worden ist?

 

Und dann geht es ja weiter, dass eine cDNA Bibliothek hergestellt werden muss,

Was ist dann die cDNA-Bibliothek?

 

Tut mir leid für die vielen fragen, aber irgendwie verwirrt mich das gerade ^^

Ich denke immer an die Proteinbiosynthese bzw Genexpression und dann überleg ich, ob jetzt die cDNA vielleicht nur Exons enthält? Dann müssten ja synthetische komplementäre Stränge hergestellt werden, was ja kein Problem wäre, sofern das Gen bekannt ist (siehe Schnittpunkt der Restriktiosnenzyme)

 

Vielen dank für eure Hilfe

 

Wasalam

[AbdelGhaffar]

 

 

cDNA bedeutet ja Copy-DNA, aber was wird kopiert? Wird das Gen bzw die DNA-Sequenz repliziert nachdem sie mit Restrikitionsenzyme geschnitten worden ist?

 

 

Wasalam

 

salam,

 

kenn mich jetz nicht so in gentechnik aus, aber schau mal unter klonierung

 

http://de.wikipedia....wiki/Klonierung

 

slm

[Nour-al-Zahraa]

 

Danke für deinen Link

 

Bin aber nicht so ein Freund von Wikipedia ^^

Trotzdem bedanke ich mich, für deine Hilfsbereitschaft

Möge Allah swt dich belohnen

 

Wasalam

[sharh]

Salam,

hast du schon google gefragt?

 

http://www.google.com/search?hl=de&client=ms-android-samsung&tbo=d&source=android-home&site=webhp&source=hp&q=cdna+faktor+8&oq=cdna+faktor+8&gs_l=mobile-gws-hp.3...2197.10749.0.11199.15.13.0.2.2.0.259.1577.5j7j1.13.0...0.0...1ac.1.mea7jG2wgbQ

[Benyamin]

 

Inshallah geht es euch gut meine lieben?

 

Ich habe eine kurze Frage, inshallah kann mir jemand weiterhelfen...

 

Momentan lerne ich die gentechnische Herstellung von Faktor 8, bzw generell die Medikamentenetwicklung aber halt am Beispiel von Faktor 8 ^^

 

Mir ist klar, dass die mRNA erstmal aus der Leberzelle isoliert werden muss, und dann mit der Reversen Transkription eine cDNA hergestellt werden muss.

 

Aber da liegt auch mein Problem, irgendwie weiß ich nicht, was ich mir unter eine cDNA vorstellen soll.

cDNA bedeutet ja Copy-DNA, aber was wird kopiert? Wird das Gen bzw die DNA-Sequenz repliziert nachdem sie mit Restrikitionsenzyme geschnitten worden ist?

 

Und dann geht es ja weiter, dass eine cDNA Bibliothek hergestellt werden muss,

Was ist dann die cDNA-Bibliothek?

 

Tut mir leid für die vielen fragen, aber irgendwie verwirrt mich das gerade ^^

Ich denke immer an die Proteinbiosynthese bzw Genexpression und dann überleg ich, ob jetzt die cDNA vielleicht nur Exons enthält? Dann müssten ja synthetische komplementäre Stränge hergestellt werden, was ja kein Problem wäre, sofern das Gen bekannt ist (siehe Schnittpunkt der Restriktiosnenzyme)

 

Vielen dank für eure Hilfe

 

Wasalam

 

Salam.

 

Die mRNA enthält die Information für die Biosynthese des gewünschten Proteins. Da wir möglichst viel von dem Produkt ( Protein ) herstellen wollen, brauchen wir möglichst viele mRNA-Moleküle in dem Reaktionsgefäß. Daher erstellen wir basierend auf der mRNA mittels einer Reversen Transkriptase die cDNA. Das ist sozusagen der Umkehrweg der Transkription. Das heißt ist cDNA ist komplementär zur mRNA, mit dem Unterschied dass eine Base ( und zwar Uracil ) ausgetauscht ist.

 

Wozu brauchen wir die cDNA? Wir vervielfältigen die cDNA mittels Polymerasekettenreaktion ( PCR ). Danach transkribieren wir wieder die cDNA in die mRNA und haben somit unsere urspüngliche mRNA vervielfältigt.

 

Mehr mRNA bedeuetet gleichzeitig mehr Produkt ( = das gewünschte Protein ).

 

wassalam.

khodahafez

[Nour-al-Zahraa]

 

 

Salam.

 

Die mRNA enthält die Information für die Biosynthese des gewünschten Proteins. Da wir möglichst viel von dem Produkt ( Protein ) herstellen wollen, brauchen wir möglichst viele mRNA-Moleküle in dem Reaktionsgefäß. Daher erstellen wir basierend auf der mRNA mittels einer Reversen Transkriptase die cDNA. Das ist sozusagen der Umkehrweg der Transkription. Das heißt ist cDNA ist komplementär zur mRNA, mit dem Unterschied dass eine Base ( und zwar Uracil ) ausgetauscht ist.

 

Wozu brauchen wir die cDNA? Wir vervielfältigen die cDNA mittels Polymerasekettenreaktion ( PCR ). Danach transkribieren wir wieder die cDNA in die mRNA und haben somit unsere urspüngliche mRNA vervielfältigt.

 

Mehr mRNA bedeuetet gleichzeitig mehr Produkt ( = das gewünschte Protein ).

 

wassalam.

khodahafez

 

 

Herzlichen dank lieber Bruder

 

Wenn ich das jetzt richtig verstanden habe, ist die mRNA ja der komplementäre Strang zum Codogenen Strang -> d.h während der Transkription wird ja das Gen des matrizenstranges hergestellt und mithilfe von ribosomen wird das gewünschte Protein hergestellt.

 

Das nur als verständnishilfe für mich

 

Also ist die cDNA der Codogene Strang wobei lediglich die Base Uracil durch thymin ersetzt wurde.

 

Als Beispiel wäre es dann so:

 

Wir haben ein mRNA eines Gens

 

Dann wäre die mRNA der 5'-> 3' Strang

5' AUGGCAAU 3'

 

Wird also per Reverse Transkriptase umgekehrt -> 3' TACCGTTA 5'

Also wäre dass der codogene Strang des Gens, und per PCR wird dieser Strang repliziert damit wir viele davon haben und somit viele mRNAs bekommen?

 

Der Strang wird also wieder in mRNA transkripert? -> 5' AUGGCAAU 3

 

Aber wo liegt der Sinn darin? Einfach um mehr mRNAs zu bekommen?

Ich meine, jetzt muss ja die vervielfältigte mRNA wieder transkribiert werden, damit wir das codogene Genstück erhalten, welches die Ribosomen als Produkt herstellen , oder nicht?

Oh man wie verwirrt ich jetzt bin ^^

 

 

Herzlichen dank lieber Bruder,

Möge Allah swt dich vielmals belohnen

 

Wasalam

[Benyamin]

Salam.

Mir ist leider ein Fehler passiert. Die cDNA die wir mittels PCR vervielfältigen schrieben wir NICHT in eine mRNA um.

Sondern: Die cDNA enthält nur Exons. Und diese erhalten wir durch eine Reverse Transkriptase und der mRNA die für das gewünschte Protein codiert. Danach vervielfältigen wir die cDNA mittels PCR und haben viele Fragmente des codierenden DNA-Abschnitts.

Dann:

Fügen wir die cDNA mittels einer Restriktionsendonuclease und einer DNA-Ligase in ein Bakterielles Expressionsplasimd ein. Dieses Plasimd ist ein Rekombinantes Plasimd. Dieses transformieren wir in Bakterienzellen. Dann Vermehren wir die Bakterien auf bzw. in einem geeigneten Medium. Dannach wenn wir genug Bakterien haben induzieren wir die Transkription. Die Bakterien produzieren das gewünschte Protein. Durch Lyse der Bakterienzellen können wir dann das Protein freisetzen und isolieren.

 

Gut, wozu brauchen wir also die cDNA? Die cDNA brauchen wir damit wir sie in das bakterielle Plasmid einfügen können, und das BAKTERIUM PRODUZIERT DAS PROTEIN. ( Die Bakterien vermehren sich ja durch Teilung, wie du sicherlich weißt. und bei der Zellteilung wird das Plasmid mit repliziert und auf die Tochterzellen weitergegeben, was bei der mRNA nicht der Fall wäre. )

Ich hoffe ich konnte dir weiterhelfen!

wassalam.

khodahafez